基因敲除動物模型服務

酒精性肝病(AH)大鼠模型建模方法【方法】1、正常組大鼠自由飲水。2、酒精性脂肪肝(alcoholicfattyliverdisease，AFL)模型組大鼠自由飲用酒精飲料，其酒精濃度從5%開始，每個濃度維持一周，依次改為10%、15%、20%、25%、30%、35%至40%，以40%濃度持續至12周。3、在實驗過程中，各組大鼠均給以普通顆粒飼料，共持續為12周。4、第12，動物禁食12h，稱重，下腔靜脈取血處死，血液離心取上清備用。【檢測】1、生化指標檢測檢測ALT、AST、TC、TG、FFA、LDL-C、HDL-C和血糖的含量。2、組織病理學酒精性脂肪肝模型組大鼠肝臟體積增大，明顯腫脹，包膜緊張，邊緣圓鈍，呈奶黃色，切面油膩，腹腔內尤以有腹膜后脂肪堆積明顯。HE染色顯示，正常組肝臟內無明顯脂肪變性，肝小葉結構正常，肝細胞索圍繞靜脈呈放射排列。模型組肝臟彌漫大量脂肪變性，細胞體積增大，呈氣球樣變。3、標志因子水平ELISA法測定血清中TNF-α和ApoB的含量。特發性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是臨床上具有代表性的一種慢性纖維化性肺。基因敲除動物模型服務

brain：腦組織；liver：肝臟；retina：視網膜，intestine：腸；muscle：肌肉；heart：心臟；kidney：腎臟；spleen：脾；b：圖1中a的統計結果；c:westernblot檢測gm20541蛋白在不同組織的表達；d:圖1中c的統計結果。圖2：gm20541基因敲除小鼠的構建路線；圖中sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖3：中長距離pcr鑒定子一代鼠的結果；圖中：a：擴增5’端長臂使用引物對gm5’lrf和sa3’r,擴增產物為；其中a2,3,6,9,10,b1為陽性；b：擴增3’端長臂使用引物對neof和gm3’lrr，擴增產物為。其中：a2,3,6,9,10,b6,9,es1g,es2g為陽性雜合子，+/+為野生型對照。圖4：gm20541基因敲除小鼠的鑒定；a：gm20541基因敲除小鼠的基因型鑒定結果；b：實時定量pcr實驗分析gm20541敲除小鼠視網膜中基因敲除效率，證明gm20541在敲除小鼠視網膜中不再表達；sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子。圖5：暗適應視網膜電圖(electroretinogram,erg)檢測結果；圖中：a-c：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應視網膜電圖軌跡圖；d：不同光強下gm20541基因敲除小鼠的暗適應視網膜電圖a波統計。湖南基因敲除動物模型建模心力衰竭(heart failure)簡稱心衰,是指由于心臟的收縮功能和(或)舒張功能發生障礙。

表明在gm20541敲除鼠視網膜外節變短退化。sixko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型小鼠；dapi(4,6-diamidino-2-phenylindole)：細胞核染料4,6-二脒基-2-苯基吲哚；rhodopsin：視紫紅質抗體；merge：兩種顏色重疊。具體實施方式為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。以下結合實施例對本發明的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例11采用rt-pcr方法檢測gm20541基因在不同組織的表達情況。方法：分別提取小鼠腦、肝臟、視網膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾的總rna，然后用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。根據gm20541的cdna序列設計引物：gm20541-cdna-f：5’-tcggtctcatcttcattccc-3；gm20541-cdna-r：5’-ggaaggctctgttccggtat-3。以提取的cdna為模板，進行rt-pcr。擴增后進行電泳，結果見圖1。結果見圖1中a和b，可以看出，通過rt-pcr方法檢測gm20541基因在小鼠腦、肝臟、視網膜、腸、肌肉、心臟、腎臟以及脾中的表達。

疾病神經系統疾病模型動物抗抑郁對腦突觸體攝取5-HT、NA、DA的抑制作用（樣品篩選、IC50測定）大鼠強迫游泳試驗（大/小鼠，Noduls軟件、視屏分析）大/小鼠小鼠懸尾試驗（Noduls軟件、視屏分析）小鼠5-羥色胺增強試驗小鼠利血平誘導眼瞼下垂試驗小鼠育亨賓毒性增強試驗小鼠高劑量阿撲拮抗小鼠大鼠慢性輕度不可預見性刺激（CUMS）模型大鼠新環境進食抑制實驗大/小鼠小鼠腦內單胺氧化酶MAO-A、MAO-B活性測定小鼠對新生大鼠海馬神經細胞的保護作用（谷氨酸損傷、過氧化氫損傷、缺糖缺氧損傷、損傷等）新生大鼠對SH-SY5Y細胞合成分泌BDNF的作用SH-SY5Y細胞抗驚厥育亨賓毒性增強試驗小鼠戊四唑驚厥小鼠荷包牡丹堿驚厥小鼠印防己驚厥小鼠抗焦慮與戊巴比妥類藥物的協同作用小鼠對巴比妥閾下劑量的影響小鼠再入睡試驗小鼠曠場實驗（大/小鼠，全程攝像監控、軟件處理）大/小鼠大鼠高架十字迷宮法（全程攝像監控、軟件處理）大鼠大鼠穿梭箱法（全程攝像監控、軟件處理）大鼠抗帕金森氏癥抗帕金森氏癥6-羥多巴胺致大鼠帕金森病模型大鼠MPTP模型（雙側損毀PD模型）大/小鼠氧化震顫素致顫模型大/小鼠疼痛。鹽酸阿霉素誘導心衰小鼠模型。

首先，預實驗必須要當做正式實驗來對待（態度要放端正，這是必須的）。預實驗的每一步都需要詳細規劃，多方籌謀。不論是實驗動物的選擇，還是檢測試劑的購買，都盡量和正式實驗統一標準。建議大家先把所有試劑和藥物購買完畢后，再去購買實驗動物。因為動物會長胖，長胖后給藥劑量就要增加，不僅多花錢，并且還容易影響實驗效果。筆者曾經提前將實驗動物買回，但因為特殊原因沒能購買到造模藥物，終只能忍痛割愛將動物贈送他人，白白虧了一筆血汗錢（那批老鼠在我這兒白吃白喝長得太胖，沒辦法用作造模）。動物及試劑購買首先需要考慮：實驗動物品種、體重、性別、周齡（通常根據既往文獻報道可以獲得答案）、數量（需要考慮到實驗有一定動物死亡率或者動物本身會打架互毆，因此需要提前購買足夠的動物）。動物購買的途徑、安置的地點，飲食管理（一般實驗室會有動物房，也可以從其他地方購買），動物免疫證明、倫理證明需要提前準備好。實驗相關的試劑和藥物：比如造模藥物和器械，動物干預所需藥物，陽物選擇及購買（有些藥物購買很困難，必須通過特殊程序才能買到）。如果涉及到有創操作，要提前準備好物（建議提前購買），手術器械。需要了解自身實驗平臺能完成哪些技術。大鼠、小鼠動物疾病模型技術。湖南動物模型構建

可以簡化實驗操作和樣品收集。基因敲除動物模型服務

我們知道WB實驗步驟繁瑣，一次實驗歷時也不短，從提蛋白到顯影結束可能要三天，我們就講一下這里面的一些關鍵環節。一、蛋白提取及變性1、提取蛋白很多經驗豐富的WB實驗者都深有體會，蛋白提取是影響結果重要的環節之一。該過程重要的是防降解和保證蛋白濃度不要太低。防降解主要有兩點，一是裂解前注意保持樣品處于低溫環境中，二是裂解時加入足夠的蛋白酶抑制劑。我們習慣先用冰冷的PBS做心臟的體循環灌注，然后冰上取腦，分離各腦區(嗅球，皮層，海馬，中腦，小腦，延髓，丘腦，紋狀體)后置于，用液氮速凍后轉移至-80度冰箱長期保存。接著是保證蛋白濃度，即要加入適量的裂解液，加太少會使蛋白提取不充分，加太多會讓蛋白濃度太低，一般經驗是這樣的，細胞樣品例如一個六孔板的細胞加60微升的裂解液，動物組織的話每毫克組織加10微升裂解液。還要加上超聲破碎處理，具體方案見討論部分。如果沒有超聲破碎儀，那就用1毫升注射器不斷抽吸，冰上反復抽吸1分鐘左右，注意不要產生過多氣泡。(需要灌注取材的視頻可以私聊獲取，由于文件過大，又比較血腥，不宜直接放到文章里。)2、蛋白變性加入上樣緩沖液后100攝氏度煮10分鐘，這里的上樣緩沖液有兩種可選。基因敲除動物模型服務