重組蛋白熱原檢測操作步驟

來源：發布時間：2025-10-11

傳統熱原檢測方法的局限性十分明顯：鱟試驗法只能特異性識別細菌內毒素，對非內毒素熱原完全無響應；家兔熱原試驗雖能篩查全類型熱原，但靈敏度低（檢測限≥5EU/kg），無法檢出微量非內毒素熱原，且無法區分熱原類型，難以追溯污染源頭；單核細胞活化反應測定（MAT）的出現有效解決了上述難題，其關鍵優勢在于：基于人源單核細胞的免疫應答機制，可同時識別所有具備生物活性的熱原（包括內毒素與非內毒素），且檢測靈敏度高（對病毒熱原檢測限低至pg級）；檢測周期短（24-48小時），可滿足產品快速放行需求；能通過細胞因子濃度定量評估熱原活性，避免“無活性熱原”的誤判。

湖州申科熱原檢測試劑盒（MAT）的單核細胞系無供體依賴性，解決PBMC因免疫狀態差異的結果波動。重組蛋白熱原檢測操作步驟

一次合格的 MAT 法熱原檢測，需同時滿足 “合格標曲” 與 “合格樣品檢測值及回收率” 兩大關鍵條件。合格標曲需具備四要素：一是良好線性，采用 4-Parameter Logistic 擬合，R2 需接近 1.0，避免線性不佳導致定量偏差；二是良好信號值，各濃度點 OD 值需呈梯度變化，高濃度點 OD 值需足夠（如上限濃度 OD600 達 1.0 左右），信號過低會影響靈敏度；三是良好 CV，復孔間 CV 需控制在合理范圍（定量限內≤25%、定量上下限≤30%），確保重復性；四是良好背景值，陰性對照 OD 值需低于標曲下限濃度點 10%，排除外源污染。合格樣品檢測值則需滿足加標回收率在 50%-200%，例如文檔中某樣品 10 倍稀釋回收率 41.3%（不合格），20 倍 71.3%（接近合格），40 倍 97.7%（合格），需在 MVD 范圍內調整稀釋倍數，同時樣品熱原濃度需低于規定限值（CLC），方可判定樣品符合要求。

抗體藥物熱原檢測操作步驟PyroSHENTEK熱原檢測試劑盒采用“單核細胞+ELISA”標準化體系，檢測結果穩定、重復性好，數據準確。

MAT法熱原檢測出現 “無信號”，需從試劑、實驗操作、儀器三方面定位原因并解決。試劑層面，抗體不足或失活會導致無法捕獲 IL-6，需核對抗體稀釋比例，檢查保存條件（如 2-8℃）與有效期，必要時更換試劑；底物失效（如變色、沉淀）會無法顯色，需觀察底物外觀，失效則更換；混合不同試劑盒試劑會因成分不匹配導致反應失敗，需使用同試劑盒試劑；ELISA 試劑盒保存不當（如反復凍融）會破壞試劑活性，需按說明書分條件保存（如抗體 2-8℃、底物避光）。實驗操作中，孵育溫度過低（<37℃）會抑制酶促反應，需提前將試劑與孔板平衡至室溫，確保孵育溫度達標；洗板機壓力過高或手動洗滌過猛，會洗去結合的抗體與酶，需調整洗板機壓力或輕柔手動洗滌；孵育時孔板未密封導致孔變干，會使反應體系破壞，需用封口膜密封孔板。儀器方面，洗板機噴頭堵塞會導致洗滌不均或未洗，需清理噴頭；酶標儀波長設置錯誤（未選 450nm）會無法檢測信號，需確認波長設置正確。

含消除炎癥成分的樣品可能抑制 IL-6 產生，需通過科學評估排除干擾，確保 MAT 法熱原檢測結果準確。根據藥典要求，若樣品能抑制單核細胞促炎癥因子釋放，需通過以下步驟驗證適用性：首先，選擇樣品 A、2A、4A 倍稀釋（均不超過上限有效稀釋倍數 MVD），避免高濃度消除炎癥成分過度抑制；其次，進行供試品加標回收率實驗，若回收率在 50%-200% 的合格范圍，說明消除炎癥成分未影響熱原檢測；再對比 “供試品配制的標曲” 與 “稀釋液配制的標曲”，若兩者 IL-6 檢測值相差在 ±20% 以內，表明樣品基質對檢測無系統性干擾。例如，某消除炎癥單抗樣品經 2 倍稀釋后，加標回收率達 120%，兩種標曲 IL-6 值相差 15%，判定可適用 MAT 法。若出現回收率偏低（<50%），可嘗試增加稀釋倍數（如 8A 倍）或采用熱滅活（若樣品耐熱）去除消除炎癥活性；若仍無法排除干擾，需結合家兔法進行對比驗證，避免因消除炎癥成分導致假陰性。

PBMC（外周血單個核細胞）用于 MAT 檢測時供體差異大，IL-6 釋放波動明顯，標準化難度高于單核細胞系。

單核細胞系憑借標準化、可控性等優勢，有效解決PBMC（外周血單個核細胞）在熱原檢測中的局限。其一，單核細胞系源自永生化細胞株（如 Mono-Mac-6），經篩選后細胞特性高度均一，消除供體差異，讓熱原檢測結果穩定性大幅提升。其二，其培養過程可控，培養基配方與環境（溫度、CO?濃度）可準確調控，能維持細胞好的活性，避免 PBMC 因分選、凍存導致的活性衰減。其三，對培養環境波動耐受性更強，可保障細胞遺傳穩定且無污染物風險，降低熱原檢測的操作復雜度與誤差率。

進行熱原實驗時，樣品有效稀釋倍數上限應通過干擾實驗確定，既保護細胞活性又保證熱原檢測靈敏度。河北生物制品熱原檢測

湖州申科 MAT法熱原檢測試劑盒細胞復融后可直接使用，無需離心復蘇，24 小時內出檢測結果。重組蛋白熱原檢測操作步驟

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒以 “簡化流程、提升效率” 為設計理念，采用即用型細胞，凍存細胞無需離心復蘇培養，復融后可直接與供試品混合共孵育，大幅節省傳統細胞預處理（如調整細胞狀態、鋪板培養）的時間成本。實驗流程清晰可控：只需按要求制備待測供試品與內毒素工作標準品，各取對應體積加入細胞懸液（每孔加樣量明確），經 37℃、5% CO?孵育 24 小時后，離心收集上清并通過 ELISA 法檢測 IL-6 含量，全程可在 24 小時內獲得穩定可靠的檢測結果。這種便捷性尤其適配實驗室高通量檢測需求，減少人員操作步驟的同時，降低了因復雜操作引入的誤差風險，兼顧效率與準確性。

重組蛋白熱原檢測操作步驟

標簽：內毒素檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測熱原檢測宿主細胞殘留DNA檢測

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