上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備

來源：發(fā)布時間：2025-11-04

美國藥典 USP 通則 <1132.1>《質(zhì)譜法測定生物藥中殘留宿主細胞蛋白》（Residual Host Cell Protein Measurement in Biopharmaceuticals by Mass Spectrometry），主要內(nèi)容是介紹 LC-MS 技術(shù)在宿主細胞殘留蛋白檢測中的應用。該通則圍繞樣品制備、質(zhì)譜測試條件建立、數(shù)據(jù)分析、質(zhì)譜方法驗證等維度，詳細說明質(zhì)譜技術(shù)應用于 HCPs 檢測的優(yōu)勢及需注意的事項。作為先進的分析技術(shù)平臺，質(zhì)譜技術(shù)在 HCPs 分析中的應用，無論是單獨使用，還是與 ELISA 及其他分析方法聯(lián)合使用，都能幫助生產(chǎn)企業(yè)在產(chǎn)品全生命周期中更清晰地理解并建立 HCPs 檢測方法，進而保障產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。

篩選HCP試劑盒需考慮線性稀釋（一步法尤重）抗基質(zhì)干擾穩(wěn)定檢測值、批間一致性、工藝匹配性等因素。上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備

上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備,宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

大腸埃希氏菌（Escherichiacoli，簡稱E.coli，又稱大腸桿菌）作為模式微生物，在生命科學研究領(lǐng)域應用較多。伴隨基因治療產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，它還成為質(zhì)粒DNA（pDNA）生產(chǎn)的主要宿主菌。質(zhì)粒樣品常規(guī)提取工藝中，常使用強堿性溶液進行細胞裂解與蛋白質(zhì)變性，這種處理使其中的宿主細胞蛋白（HCPs）與傳統(tǒng)物理破碎法得到的HCPs差異明顯，進而導致采用免疫學原理的檢測方法時，殘留檢測結(jié)果偏差較大。湖州申科生物的E.coli克隆菌堿裂HCP殘留檢測試劑盒，適用于大腸埃希氏菌（即大腸桿菌）克隆菌株的HCPs檢測，涵蓋DH5α、Top10、JM109等常見菌株。該試劑盒的抗體制備過程中，采用堿裂工藝制備的HCPs免疫動物，得到專屬抗體，可用于經(jīng)堿液裂解工藝處理后的宿主細胞蛋白（HCPs）定量檢測。

細胞基因治療產(chǎn)品用宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測常見問題分析湖州申科生物目前已承接常見宿主類型的HCP定制化開發(fā)，如期交付率達到100%。

湖州申科生物專注于提供契合嚴苛法規(guī)要求的宿主細胞蛋白（HCP）ELISA 檢測試劑盒，主要目標是滿足抗體藥、疫苗等生物制品在 IND/BLA 申報階段的監(jiān)管標準。為實現(xiàn)這一目標，公司搭建了全流程依規(guī)開發(fā)的質(zhì)量管控體系 —— 整個開發(fā)過程嚴格遵循 ISO 13485 質(zhì)量標準，同時能充分滿足用戶審計需求，從體系層面保障產(chǎn)品合規(guī)性。其開發(fā)流程包含三大關(guān)鍵階段，前兩大基礎(chǔ)階段聚焦關(guān)鍵物料的品質(zhì)把控：一是 HCP 殘留定量檢測參考品開發(fā)，重點是構(gòu)建可靠的 HCP 抗原參考品，需完成抗原表征、量值溯源與賦值、均一性驗證及穩(wěn)定性考察等工作，為檢測準確性與樣品代表性奠定基礎(chǔ)；二是高質(zhì)量大批量抗體制備，通過優(yōu)化的 HCP 抗原動物免疫策略，搭配嚴謹?shù)目贵w質(zhì)量標準（含標準制定、覆蓋率驗證）與穩(wěn)定的制備工藝，生產(chǎn)出高特異性、廣覆蓋度的檢測抗體，確保后續(xù)檢測的特異性與靈敏度。

昆蟲細胞桿狀病毒表達系統(tǒng)（IC-BEVS）是一種真核表達系統(tǒng)，以桿狀病毒為外源基因載體，以昆蟲細胞為宿主實現(xiàn)外源蛋白的生產(chǎn)。該系統(tǒng)具備便于規(guī)模化生產(chǎn)、培養(yǎng)成本低、生物安全性高等優(yōu)勢，近年已逐步應用于重組蛋白、rAAV 載體、亞單位疫苗（如病毒樣顆粒（VLP）疫苗）等產(chǎn)品的生產(chǎn)，在生物制品重組蛋白表達領(lǐng)域已得到廣泛應用。Sf9 細胞系源自草地夜蛾細胞系（Spodoptera frugiperda cell line，簡稱 Sf），是當前較為常用的昆蟲細胞系之一。SHENTEK^® Sf9 HCP 殘留蛋白檢測試劑盒（一步酶聯(lián)免疫吸附法），可對采用 Sf9 細胞系生產(chǎn)的生物制品中宿主細胞蛋白（HCP）殘留進行定量檢測。該試劑盒的抗體覆蓋率分別為 70.4%-96.0%（采用 IMBS-2D 法）和 91.2%（采用 IMBS-MS 法，Unique Peptide ≥2）。

湖州申科自主研發(fā)IMBS抗體覆蓋率檢測法及低豐度HCP富集技術(shù)，合作完成多項課題并發(fā)表成果。

宿主細胞蛋白（HCP）ELISA 定制化開發(fā)平臺需具備完善的開發(fā)體系、可靠的技術(shù)平臺與專業(yè)的開發(fā)團隊，以此實現(xiàn)長期穩(wěn)定供應符合法規(guī)要求的試劑盒。其中，校準品作為關(guān)鍵原材料，其良好的穩(wěn)定性與溯源保障對試劑盒生命周期至關(guān)重要。為確保校準品穩(wěn)定，通常采用凍干工藝制備，通過單因素方差分析方法評估其均一性，并依據(jù)法規(guī)規(guī)定的蛋白定量方法為校準品賦值，同時溯源至國家標準品（如有）或 BSA 國家標準品，從源頭保障檢測的準確性與合規(guī)性，為后續(xù)檢測體系的可靠運行奠定基礎(chǔ)。

HCP 檢測試劑盒開發(fā)要兼顧法規(guī)合規(guī)、物料充足穩(wěn)定、團隊專業(yè)響應與案例積累，形成系統(tǒng)性保障能力。浙江釀酒酵母宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測供應廠家

生物制品臨床申報需提交 HCP 抗體覆蓋率數(shù)據(jù)，否則可能面臨監(jiān)管發(fā)補要求。上海生物制品宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測抗體制備

在宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測的分析方法里，ELISA法應用較多，也是QC日常放行檢測的主要方式。該方法操作相對簡便、檢測精度較好，便于設(shè)定控制范圍與制定技術(shù)規(guī)范，適用于產(chǎn)品開發(fā)及過程控制；不過，ELISA檢測依賴抗原與抗體的特異性結(jié)合，因此以生物制品中HCP為免疫原制備的抗體質(zhì)量，對檢測結(jié)果影響極大。無論是市售ELISA試劑盒，還是實驗室自制的多克隆抗體，若抗體的特異性與適用性不足，都可能導致HCP漏檢，進而給生物制品質(zhì)量安全埋下隱患。另外，ELISA檢測HCP時采用多克隆抗體，無法針對性反映高風險HCP殘留蛋白的實際存在狀況。

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標簽：內(nèi)毒素檢測熱原檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測

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