上海細菌內毒素檢測抗干擾方案

來源：發布時間：2025-10-13

當實驗室更換內毒素檢測方法或更換試劑供應商時，需進行方法比對與橋接驗證。比對實驗需選取至少 3批代表性樣品，分別用新舊方法檢測，計算結果相關性（如相關系數 R2≥0.95）和偏差（≤20%）。橋接驗證還需評估新方法的特異性、靈敏度是否與舊方法一致，如確認對高風險樣品（如含 β- 葡聚糖的樣品）的抗干擾能力相當。若方法變更涉及法規申報產品，需將驗證數據納入申報資料，證明變更后方法仍能有效控制內毒素風險，符合 FDA、NMPA 等監管機構對方法變更的合規性要求。

細菌內毒素檢查用水需符合滅菌注射用水標準，內毒素含量有明確限值且無干擾。上海細菌內毒素檢測抗干擾方案

內毒素檢測常與熱原檢測混淆，二者既有關聯又有區別：熱原是指所有能引起發熱的物質（包括內毒素、病毒、真菌等），通過傳統家兔熱原試驗檢測；內毒素是熱原的主要成分（占 90% 以上），檢測更具特異性。目前，家兔熱原試驗因操作復雜、動物成本高，已逐漸被單核細胞活化反應測定法（MAT）替代，但部分產品（如放射性質藥物、血液制品）仍需保留家兔試驗作為補充。法規要求內毒素檢測結果需與熱原風險關聯，若內毒素檢測合格但臨床出現熱原反應，需排查是否存在非內毒素類熱原，通過聯合檢測確保產品安全性。

上海細菌內毒素檢測抗干擾方案內毒素干擾試驗回收率需在 50%-200%，驗證樣品基質不影響內毒素檢出。

低內毒素回收（LER）的主要形成機制之一是螯合劑與非離子表面活性劑的協同作用，直接影響內毒素檢測結果。第一步，樣品中的螯合劑（如檸檬酸鹽）會去除二價陽離子（Mg2?、Ca2?），削弱 LPS 聚集體的鹽橋結構，降低其剛性；第二步，表面活性劑（如吐溫 20）嵌入 LPS 分子，形成混合聚集體（膠體、層狀結構），改變 LPS 的超分子形態。LPS 從 “可檢測態” 轉為 “不可檢測態”，導致鱟試劑中的 C 因子無法與內毒素結合，內毒素檢測出現假陰性。這種變化是時間依賴的，與稀釋度無關，給常規內毒素檢測帶來獨特挑戰。

在開展內毒素檢測時，樣品的 pH 值與二價離子（Mg2?、Ca2?）水平是影響鱟試劑酶促反應的關鍵因素，直接關系檢測結果的準確性。鱟試劑檢測內毒素依賴絲氨酸蛋白酶的級聯放大反應，該反應的合適 pH 值范圍為 6.0-8.0，若樣品過酸或過堿，會快速降低酶活性，甚至導致酶徹底失活，進而出現內毒素檢測假陰性。針對這一問題，可使用 0.1N 或更低濃度的 HCl/NaOH 溶液，將樣品 pH 值準確調節至適宜區間，為反應提供穩定環境。同時，二價離子是反應必需的輔助因子：Mg2?是內毒素活化鱟試劑的關鍵，缺乏會直接阻斷反應啟動；Ca2?雖參與酶促反應，但濃度過高會反向抑制反應效率。若樣品中含有肝素鈉、EDTA、檸檬酸鈉等螯合劑，會與二價離子結合導致其濃度不足，此時可通過內毒素檢查用水稀釋樣品降低螯合劑濃度，或添加特定二價離子試劑補充，但需嚴格控制離子濃度，避免過度增強反應引發誤差，確保內毒素檢測能真實反映樣品中的內毒素殘留量。

細菌內毒素檢測中，rCR 對高蛋白（如單抗、FBS）、細胞培養上清等特殊樣本適配性好。

實驗數據充分證明，內毒素檢測重組級聯試劑（rCR）與天然鱟試劑的檢測結果具有高度等效性，可實現方法無縫切換。對細胞培養輔料、凍干甲型肝炎疫苗、單抗 A/B 等 8 類代表性樣品的平行檢測顯示，rCR 的檢測平均值為 0.001-0.026EU/mL，天然鱟試劑為 0.002-0.034EU/mL，兩者偏差≤0.003EU/mL。加標回收率方面，rCR 為 70%-175.4%，天然鱟試劑為 82.2%-156.6%，均處于 50%-200% 的合格范圍。批內精密度上，rCR 的 CV 值為 0.524%-14.716%，天然鱟試劑為 0.908%-12.348%，均滿足法規對精密度的要求。這種等效性確保了實驗室在切換至重組試劑時，歷史數據和工藝控制標準的連續性，降低方法轉換風險。

β- 葡聚糖刺激 G 因子致假陽性，用含抗增液的鱟試劑可優化內毒素檢測結果。上海非動物源內毒素檢測

內毒素檢測需關注制劑成分，螯合劑和表面活性劑可能誘發“低內毒素回收（LER）”。上海細菌內毒素檢測抗干擾方案

隨著生物制藥行業的快速發展，注射用藥劑、疫苗等制劑及植入性醫療器械的生產需求激增，直接推動了內毒素檢測試劑的市場需求。然而，傳統內毒素檢測嚴重依賴天然鱟試劑，而全球鱟資源正面臨衰減危機。2021 年 2 月，我國國家林業和草原局、農業農村部聯合公告將鱟科動物列為國家二級保護動物，嚴格限制捕撈配額，導致天然鱟試劑價格持續上漲，甚至出現關鍵檢測環節的供應短缺問題。在此背景下，湖州申科研發的重組級聯試劑（rCR）通過基因工程技術實現無動物源性生產，徹底擺脫對鱟血資源的依賴。該試劑支持 “減少、替代、優化” 的 3R 動物保護原則，不僅解決了資源受限的行業痛點，還能保障長期穩定供應，為內毒素檢測領域的可持續發展提供了理想解決方案。

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標簽：內毒素檢測熱原檢測宿主細胞殘留DNA檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

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