北京生物制品內毒素檢測凝膠法鱟試劑

來源：發布時間：2025-11-05

重組試劑（rCR、rFC）是解決 LER 的重要工具，優化內毒素檢測性能。重組鱟試劑（rCR）通過基因工程表達 C、B 因子及凝固酶原，剔除 G 因子，完全模擬天然鱟級聯反應，靈敏度達 0.005EU/mL，與天然方法橋接容易，能避免 LPS 結構變化導致的假陰性；重組 C 因子（rFC）靈敏度 0.005-5EU/mL，性狀穩定、均一性好，雖需熒光酶標儀，但對部分 LER 場景（如無蛋白質干擾）適配性強。二者擺脫了天然鱟試劑的局限，為內毒素檢測提供更抗 LER 的選擇，契合行業技術趨勢。

70% 葡萄糖等高滲溶液會使鱟試劑蛋白變性，檢測前需用檢查用水稀釋樣本。北京生物制品內毒素檢測凝膠法鱟試劑

內毒素檢測方法驗證需覆蓋多項參數，確保方法可靠：線性范圍需包含樣品預期濃度（如 0.01-10 EU/mL），相關系數 R2≥0.98；準確度通過加標回收率評估，應在 50%-200% 范圍內；精密度包括批內和批間精密度，CV 值均應≤15%；檢測限（LOD）需低于產品限值的 1/2（如限值 0.5 EU/mL，LOD 應≤0.25 EU/mL）；專屬性需證明無干擾物質影響（如 β- 葡聚糖、蛋白質不引發假陽性）。驗證通過后，方法需經實驗室負責人批準方可使用，且定期需進行一次回顧性驗證，確認方法持續有效。

北京生物制品內毒素檢測凝膠法鱟試劑細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁脂多糖，細菌死亡裂解釋放，微量級即致人體發熱、休克等威脅。

樣品中的高滲透性成分（如高濃度鹽、糖）會通過改變反應體系滲透壓，抑制鱟試劑反應，影響內毒素檢測結果。例如，濃度為 70% 的葡萄糖溶液、高濃度氯化鈉溶液等，會形成高滲透壓環境，導致鱟試劑中的蛋白質脫水變性，喪失酶活性，進而使內毒素無法被正常檢測，出現假陰性。這類高滲透性基質的干擾機制明確 —— 通過破壞蛋白質結構影響酶促反應，且干擾程度與濃度正相關。為消除這類干擾，解決方案是使用內毒素檢查用水稀釋樣品：根據樣品滲透性高低，逐步稀釋至適宜濃度（通常需稀釋至滲透壓與生理鹽水接近），降低對蛋白質的脫水作用，恢復鱟試劑中酶的活性。稀釋過程中需注意，稀釋倍數需在方法驗證確定的 “無干擾稀釋范圍” 內，避免因過度稀釋導致內毒素濃度低于檢測限，確保內毒素檢測既能規避高滲透性抑制，又能準確捕捉微量內毒素。

重組級聯試劑作為內毒素檢測鱟試劑的理想替代方案，其具備的優勢有：①優化的G因子級聯反應，無G因子旁路干擾。采用基因重組技術表達鱟血細胞中的C因子（Factor C）、B因子（Factor B）和凝固酶原（Proclotting enzyme），無G因子旁路干擾，排除1，3-β-D葡聚糖假陽性風險。②依然采用動態顯色法原理，可沿用天然鱟試劑檢測設備。重組級聯試劑（rCR）,與天然鱟（動態顯色法）具有相同的操作流程、檢測設備、分析方法，用戶可以沿用天然鱟的儀器、軟件、耗材、人員培訓、驗收程序等，無需投入額外成本。③具有與天然鱟的相同反應機制，檢測結果具有等效性。完全模擬了天然鱟試劑的酶聯反應，由3種蛋白組成的級聯反應機制提供了信號放大的過程，確保了檢測的準確性和靈敏度。湖州申科按照藥典要求進行替代方法驗證，無縫銜接技術轉移，助力用戶從方法驗證到工藝落地，從數據合規到全球申報。

內毒素指示劑（ECV）是凍干脂多糖，監測制藥工藝高溫除內毒素效果。

樣品中的脂質體與表面活性劑，會通過不同機制干擾內毒素檢測，需結合基質特性選擇處理方式。脂質體的干擾體現在兩方面：一是脂質雙分子層會包裹內毒素，使其無法與鱟試劑接觸，導致假陰性；二是脂質體的膠體性質會干擾凝膠形成（凝膠法）或光度信號讀?。岫?/ 顯色法）。針對完整脂質體制劑，可先用生理鹽水稀釋降低脂質體濃度，減少包裹作用；若需徹底釋放內毒素，還可使用 DMSO、乙醇或甲醇等溶劑裂解脂質體，暴露被包裹的內毒素。表面活性劑的干擾則源于其對物質結構的改變：既可能破壞內毒素的聚集體結構，影響其活性；又可能導致鱟試劑中蛋白質變性，抑制反應。對此，可通過內毒素檢查用水或生理鹽水稀釋樣品，降低表面活性劑濃度，消除其對結構的破壞作用。這些針對性處理能有效解決脂質體與表面活性劑的干擾，確保內毒素檢測結果真實可靠。

重組級聯試劑（rCR）無動物源，不含 G 因子，可避免 β- 葡聚糖致內毒素檢測假陽性。原料藥內毒素檢測動態顯色法鱟試劑

含蛋白酶的樣本致假陽性時，可稀釋后 70℃加熱 5-15min 滅活，再做內毒素檢測。北京生物制品內毒素檢測凝膠法鱟試劑

當實驗室更換內毒素檢測方法或更換試劑供應商時，需進行方法比對與橋接驗證。比對實驗需選取至少 3批代表性樣品，分別用新舊方法檢測，計算結果相關性（如相關系數 R2≥0.95）和偏差（≤20%）。橋接驗證還需評估新方法的特異性、靈敏度是否與舊方法一致，如確認對高風險樣品（如含 β- 葡聚糖的樣品）的抗干擾能力相當。若方法變更涉及法規申報產品，需將驗證數據納入申報資料，證明變更后方法仍能有效控制內毒素風險，符合 FDA、NMPA 等監管機構對方法變更的合規性要求。

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標簽：內毒素檢測熱原檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測

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