上海內毒素檢測方法驗證

來源：發布時間：2025-11-03

湖州申科生物動態顯色法鱟試劑用于定量測定人用和動物用注射藥物、生物制品及醫療器械等樣本中的細菌內毒素的含量。細菌內毒素能特異性地活化反應主劑中的 C 因子，活化的 C 因子活化 B 因子，活化的 B 因子進而活化凝固酶原，凝固酶水解反應中的顯色底物，產生游離的pNA（對硝基苯胺）從而引起吸光度變化，根據動態檢測溶液吸光度變化率對內毒素進行定量。本品能夠快速、高靈敏度地定量檢測樣品中的內毒素水平，適用于各種實驗室和工業生產場景，確保產品質量和安全性。

內毒素工作標準品（CSE）稀釋液配制時渦旋很重要，可使內毒素充分溶解，保證濃度準確。上海內毒素檢測方法驗證

湖州申科重組級聯試劑（rCR）在關鍵性能指標上表現優異，滿足內毒素檢測的嚴苛要求。靈敏度方面，其檢測范圍覆蓋 0.005-5EU/mL，可準確捕捉微量內毒素殘留，適配基因治療、血液制品等低限值需求場景。標準曲線線性良好，R2≥0.990，確保定量結果的準確性。反應效率上，rCR 只需 60 分鐘即可完成檢測，較部分競品的 90-120 分鐘大幅縮短，提升檢測周轉效率?？垢蓴_性實驗顯示，對細胞培養輔料、300g/L 葡萄糖、FBS 血清、單抗等 8 類復雜樣品，rCR 在較低稀釋倍數下加標回收率可達 70%-175.4%，優于重組 C 因子法。批間一致性方面，多批次試劑檢測同一樣品的 CV 值≤15%，穩定性遠超行業平均水平，為長期質控提供可靠保障。

廣東化學制藥內毒素檢測動態顯色法鱟試劑內毒素檢查用水經二次精制，無菌無熱原，避免檢測假陽假陰。

針對單核細胞活化反應測定法（MAT）通過檢測內毒素的生物活性，有效規避低內毒素回收（LER）對內毒素檢測的影響。其原理是：熱原（包括被掩蔽的 LPS）活化單核細胞表面的 TLR 受體，釋放 IL-6 等細胞因子，通過 ELISA 檢測 IL-6 濃度，結合標準曲線推算熱原含量。即使 LPS 因 LER 改變超分子結構，只要仍具生物活性，就能被 MAT 法識別。這種 “檢測活性而非結構” 的特性，使 MAT 法成為 LER 場景下內毒素檢測的重要補充，與其他方法協同構建高效可靠的熱原防控體系。

低內毒素回收（LER）的主要形成機制之一是螯合劑與非離子表面活性劑的協同作用，直接影響內毒素檢測結果。第一步，樣品中的螯合劑（如檸檬酸鹽）會去除二價陽離子（Mg2?、Ca2?），削弱 LPS 聚集體的鹽橋結構，降低其剛性；第二步，表面活性劑（如吐溫 20）嵌入 LPS 分子，形成混合聚集體（膠體、層狀結構），改變 LPS 的超分子形態。LPS 從 “可檢測態” 轉為 “不可檢測態”，導致鱟試劑中的 C 因子無法與內毒素結合，內毒素檢測出現假陰性。這種變化是時間依賴的，與稀釋度無關，給常規內毒素檢測帶來獨特挑戰。

湖州申科內毒素檢測服務含低內毒素回收，通過不同樣品前處理方式搭配多種檢測方法，較大程度解決LER問題。

樣品中的高滲透性成分（如高濃度鹽、糖）會通過改變反應體系滲透壓，抑制鱟試劑反應，影響內毒素檢測結果。例如，濃度為 70% 的葡萄糖溶液、高濃度氯化鈉溶液等，會形成高滲透壓環境，導致鱟試劑中的蛋白質脫水變性，喪失酶活性，進而使內毒素無法被正常檢測，出現假陰性。這類高滲透性基質的干擾機制明確 —— 通過破壞蛋白質結構影響酶促反應，且干擾程度與濃度正相關。為消除這類干擾，解決方案是使用內毒素檢查用水稀釋樣品：根據樣品滲透性高低，逐步稀釋至適宜濃度（通常需稀釋至滲透壓與生理鹽水接近），降低對蛋白質的脫水作用，恢復鱟試劑中酶的活性。稀釋過程中需注意，稀釋倍數需在方法驗證確定的 “無干擾稀釋范圍” 內，避免因過度稀釋導致內毒素濃度低于檢測限，確保內毒素檢測既能規避高滲透性抑制，又能準確捕捉微量內毒素。

外源性熱原含細菌內毒素、脂磷壁酸、酵母多糖等，單核細胞活化反應檢查法可檢出全部熱原。北京合規性內毒素檢測

內毒素檢測的方法多樣性、多影響因素及實驗干擾，會導致自檢數據與廠家數據存在差異。上海內毒素檢測方法驗證

湖州申科建立了標準化的低內毒素回收（LER）技術服務流程，全周期支撐內毒素檢測優化：7 個自然日內完成客戶溝通與 LER 確認，用天然鱟、重組鱟等方法檢測并出具報告；60 個自然日開展方法開發，分析 LER 成因（如螯合劑、蛋白質 IP）并研究去掩蔽方案；30 個自然日進行 HTS 驗證，完成 3 批 LER 實驗與干擾實驗，交付穩定試劑盒、操作規程及培訓；再協助方法轉移與 cGMP 驗證。流程每環節均圍繞內毒素檢測展開，確保企業高效解決 LER 問題，滿足法規要求。

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標簽：宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測內毒素檢測宿主細胞殘留DNA檢測熱原檢測

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